关键词:
三氧化二砷
纳米技术
NB4细胞
凋亡
摘要:
急性早幼粒细胞白血病是一类预后凶险的白血病,是急性髓系白血病的一种特殊亚型,约占急性髓系白血病的6.2%-40.2%。临床表现为起病急,病情重,常伴有严重出血及DIC。三氧化二砷(As2O3)系传统中药砒霜的主要成分,用于治疗APL取得了较高的缓解率,基础研究方面也取得了令人瞩目的进展。但目前临床应用的亚砷酸注射液,静脉给药后可产生心脏毒性、浆膜腔积液、肝、肾功能损伤、消化道不良反应及末梢神经炎等毒副反应。因此,在看到砷制剂临床应用价值的同时,希望通过改变传统制剂工艺,采用现代技术制备新剂型含砷中药以提高生物利用度、减少药物用量、减低毒副作用并提高疗效。 目的研究三氧化二砷(As2O3)新剂型纳米粒的制备方法及体外对NB4细胞增殖及凋亡作用的影响,并与传统亚砷酸(As2O3)进行比较。 方法①采用溶胶-凝胶法制备As2O3纳米粒,用透射电镜(transmission electron microscope, TEM)、扫描电镜(scanning electron microscope, SEM)、能谱仪(energy dispersive spectrometer, EDS)、纳米粒径分布统计分析软件进行表征和特性检测;②氢化物发生—原子荧光光谱法测定As2O3纳米粒胶体溶液中As的浓度;③MTT法研究As2O3纳米粒对NB4细胞的增殖抑制作用;光镜观察AS2O3纳米粒处理细胞后的形态学改变,并与传统的剂型三氧化二砷(亚砷酸注射液)进行比较;采用流式细胞仪(FCM)测定As2O3纳米粒和亚砷酸诱导NB4细胞的凋亡率;④Western-blot方法检测As2O3纳米粒和亚砷酸处理NB4细胞后Bcl-2蛋白的表达改变。 结果实验制备的As2O3纳米粒子呈圆形或椭圆形,电子密度高,分散度好,粒径分别约为<10nm和40nm,经能谱仪检测证实为AS2O3。亚砷酸和AS2O3纳米粒对NB4细胞均有抑制作用,抑制作用随着作用浓度的增加、作用时间的延长,抑制率随之增加,抑制率呈明显的时间—剂量依赖,而且相同条件下As2O3纳米粒的抑制作用更显著。流式细胞仪结果也显示了同样的诱导细胞凋亡作用。另外,亚砷酸和As2O3纳米粒可下调NB4细胞中Bcl-2蛋白的表达,亚砷酸和AS2O3纳米粒对细胞的抑制作用可能是下调Bcl-2的蛋白来实现的,而As2O3纳米粒的作用更明显。 结论1、成功制备了大小约为<10nm和40nm两种粒径的AS2O3纳米粒子电镜下呈圆形或椭圆形,分散性好,EDS检测证实为As2O3,无其它成份:2、MTT法检测细胞增殖活性:亚砷酸和As2O3纳米粒均可明显抑制NB4细胞的增殖,其作用呈时间和浓度依赖,而且在相同的浓度和培养条件下,As2O3纳米粒显示出比亚砷酸更强的细胞毒作用;3、流式细胞仪分析细胞凋亡率结果显示:亚砷酸和As2O3纳米粒均可诱导NB4细胞凋亡,且相同浓度和培养条件下,As2O3纳米粒比亚砷酸作用更强;4、Western blot结果显示:亚砷酸和As2O3纳米粒均通过下调NB4细胞中Bcl-2蛋白的表达引起细胞凋亡,而As2O3纳米粒下调Bcl-2蛋白表达的程度更显著。