关键词:
脑出血
血红素加氧酶-1
神经细胞
微小RNA
摘要:
目的探讨脑出血患者及大鼠炎性损伤中血红素加氧酶(HO)-1相关微小RNA(miR)筛查及其在动物模型中的作用机制。方法收集60例脑出血患者(研究组)及30名健康体检者(对照组),采用逆转录(RT)-聚合酶链反应(PCR)检测血清中HO-1及miR-7、miR-124表达。将60只大鼠随机分为正常组、脑出血组、空载组及HO-1组各15只,除正常组外,其余大鼠建立脑出血大鼠模型,建模成功后,脑出血组右侧侧脑室注射20μl的0.9%生理盐水,空载组注射20μl的0.9%生理盐水+1.0×10^(10)PFU/1μl HO-1空载体,HO-1组注射20μl的0.9%生理盐水+1.0×10^(10) PFU/1μl HO-1病毒载体,正常组不做处理。RT-PCR检测各组血清中HO-1及miR-7、miR-124表达;苏木素-伊红(HE)染色观察脑组织病理形态;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法检测各组脑组织神经细胞凋亡;Western印迹检测脑组织Toll样受体(TLR)4及核因子(NF)-κB蛋白表达水平。Pearson分析HO-1、miR-7及miR-124 mRNA相关性。结果与对照组相比,研究组血清中HO-1及miR-7 mRNA表达降低,miR-124 mRNA表达升高,差异显著(P<0.05)。与正常组相比,脑出血组脑组织中HO-1及miR-7表达显著降低,miR-124表达显著升高(P<0.05),脑出血组和空载组上述指标比较无统计学差异(P>0.05);与脑出血组相比,HO-1组HO-1及miR-7表达显著升高,miR-124表达显著降低(P<0.05);正常组脑组织形态正常,结构完整;脑出血组及空载组组织出现组织纤维,细胞水肿,细胞核逐渐变形及皱缩,大量细胞炎性浸润;HO-1组组织纤维及细胞水肿改善,炎性因子浸润显著降低。与正常组比较,脑出血组TLR4、细胞质及细胞核中NF-κB蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与脑出血组相比,HO-1组TLR4、细胞质及细胞核中NF-κB蛋白表达水平显著降低(P<0.05),脑出血组及空载组以上指标无统计学差异(P>0.05)。Pearson分析结果证实,HO-1与miR-7呈明显正相关(r=0.239,P=0.012),HO-1与miR-124呈明显负相关(r=-0.320,P<0.001),miR-7与miR-124呈明显负相关(r=-0.097,P=0.025)。结论HO-1能够通过抑制神经细胞凋亡,改善脑组织病理损伤,并能够降低miR-124表达,升高miR-7活性,其机制可能与抑制TLR4及NF-κB表达相关。