关键词:
壮通饮
脑梗死
缺血再灌注
神经功能
线粒体自噬
摘要:
目的 探讨壮通饮对脑缺血再灌注小鼠神经细胞损伤的影响及其作用机制。方法 采用线栓大脑中动脉栓塞法诱导建立小鼠脑缺血再灌注模型,造模成功后的6~7周龄雄性C57BL6J小鼠随机分为模型组、壮通饮组、阿司匹林组、壮通饮联合阿司匹林组,各组再随机分为1、3、7 d时点组,另设不造模的空白组和假手术组,每组10只,按照分组灌胃给药至相应时点。记录各组每日体质量及Zea Longa评分,采用TTC染色法测定脑缺血小鼠的脑梗死体积百分比;HE染色观测缺血病理改变情况,TUNEL染色比较神经细胞凋亡情况,透射电镜观测神经细胞线粒体结构改变及自噬情况,Western blot以及RT-PCR技术分析P62、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Bc1-2/腺病毒E1B19kD相互作用蛋白3(Bc1-2/adenovirusE1B 19kDa interacting protein3, BNIP3)、β-actin蛋白或基因表达情况。结果 与空白组、假手术组相比,模型组体质量明显下降(P<0.05),TTC染色可见脑组织缺血梗死,出现神经细胞凋亡及线粒体损伤。与模型组相比,各给药组体质量升高(P<0.05),行为学评分降低(P<0.05),梗死体积降低,且持续减小(P<0.05);神经细胞凋亡率降低(P<0.05)。模型组线粒体结构损伤明显较重,在1 d时各给药组即可观测到较多线粒体自噬小体,而模型组在3 d时才可观测到,在7 d时各给药组大多数线粒体结构完整,可见被溶酶体消化完成的脂滴,而模型组可见自噬小体与自噬溶酶体同时存在。与模型组比较,各给药组P62蛋白表达在1 d时降低,3、7 d时升高(P<0.05);LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的蛋白比值以及P62、BNIP3的基因表达水平在1 d时升高,7 d时降低(P<0.05)。在各给药组中,壮通饮联合阿司匹林组各项指标均优于其他给药组及模型组(P<0.05)。结论 壮通饮能够减轻脑缺血再灌注小鼠的神经细胞损伤,这可能与促进神经细胞发生线粒体自噬,维持细胞内线粒体稳态有关。