关键词:
脑出血
亚精胺
自噬
神经炎症
氧化应激
摘要:
目的探讨亚精胺(spermidine,SPD)在脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)中的作用及其潜在机制。方法选用8~10周龄的雄性C57BL/6小鼠构建胶原酶诱导的ICH模型。将108只小鼠随机分为3组,即假手术组、ICH组和亚精胺治疗组,每组36只。亚精胺治疗组小鼠在术后接受连续3 d的15 mg/kg亚精胺腹腔注射。在ICH后第3天,通过神经行为学测试(改良Garcia神经功能评分、前肢放置试验)评估小鼠神经功能缺损、HE染色观察脑组织病理损伤、免疫荧光染色检测小胶质细胞/巨噬细胞与星形胶质细胞活化,以及通过Western blot分析自噬标志物Beclin-1、P62及炎症因子MMP-9、NLRP3、COX-2的表达。以血红素刺激HT-22细胞模拟体外ICH,3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)作为自噬抑制剂。将细胞随机分为4组(n=7):对照组、血红素组、血红素+亚精胺组和血红素+亚精胺+3-MA组。在血红素处理24 h后,通过CCK-8法检测各组细胞存活率、Western blot检测自噬相关蛋白LC3-II、P62的表达,通过测定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性与丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量以评估氧化应激水平。结果在ICH造模后第3天,与ICH组相比,亚精胺显著减少脑损伤面积(P<0.05),促进神经功能恢复(P<0.05),激活自噬Beclin-1表达升高,P62表达降低(P<0.05),抑制小胶质细胞/巨噬细胞和星形胶质细胞活化(P<0.01),降低MMP-9、NLRP3及COX-2表达,同时提高SOD活性并减少MDA含量(P<0.05)。在细胞实验中,亚精胺提高HT-22细胞存活率(P<0.05)、增强SOD活性并降低MDA水平(P<0.01),而自噬抑制剂3-MA有效抑制了自噬,使LC3-II表达降低、P62表达升高(P<0.05),并完全逆转了上述保护效应(P<0.05)。结论亚精胺在ICH后激活自噬并通过抑制神经炎症和氧化应激改善ICH后脑损伤。